酶ELISA試劑盒，即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒，是酶免疫測(cè)定技術(shù)中應(yīng)用廣的技術(shù)。其基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結(jié)合，這種結(jié)合既不會(huì)改變抗體的免疫學(xué)特性，也不影響酶的生物學(xué)活性。酶標(biāo)記抗體可以與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。在加入底物溶液后，底物在酶的作用下會(huì)使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型，從而出現(xiàn)顏色反應(yīng)。因此，可以通過(guò)底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定有無(wú)相應(yīng)的免疫反應(yīng)，顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。
酶ELISA試劑盒在使用前的準(zhǔn)備是確保實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性和可重復(fù)性的關(guān)鍵步驟。以下是系統(tǒng)化的準(zhǔn)備流程及注意事項(xiàng)：
一、試劑與材料準(zhǔn)備
試劑平衡與分裝
溫度平衡：
未開(kāi)封的試劑盒需提前從冰箱（2-8℃）或冷凍（-20℃）中取出，室溫（20-25℃）平衡30分鐘，避免溫差導(dǎo)致冷凝水稀釋試劑。
分裝處理：
若試劑需多次使用，建議分裝成單次用量（如標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)抗體），避免反復(fù)凍融導(dǎo)致失活。
試劑檢查
外觀確認(rèn)：檢查液體試劑是否渾濁、沉淀或變色（如TMB底物變藍(lán)可能已氧化失效）。
有效期驗(yàn)證：確保試劑在保質(zhì)期內(nèi)，開(kāi)封后未過(guò)期（如部分試劑開(kāi)封后穩(wěn)定性僅1個(gè)月）。
標(biāo)準(zhǔn)品配制
梯度稀釋：根據(jù)說(shuō)明書(shū)用樣本稀釋液（如PBS或?qū)Ｓ镁彌_液）將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成系列濃度（如1:2遞進(jìn)稀釋），用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
混勻操作：使用渦旋儀輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡，影響準(zhǔn)確性。
二、實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備
耗材預(yù)處理
酶標(biāo)板：
檢查板條是否變形或受潮，開(kāi)封后未使用的板條需密封并加干燥劑保存。
如需自備板條，選擇高結(jié)合力ELISA板（如平底96孔板），避免使用含去垢劑的板子。
吸頭與容器：使用無(wú)酶、無(wú)內(nèi)毒素的離心管及一次性吸頭，避免交叉污染。
儀器校準(zhǔn)
移液器校準(zhǔn)：確保移液精度（如使用0.1-10μL、20-200μL量程），定期校準(zhǔn)。
洗板機(jī)設(shè)置：調(diào)整洗板次數(shù)（通常5次）、浸泡時(shí)間（30秒）及吸液速度，避免殘留或沖掉結(jié)合抗體。
三、樣本處理
樣本采集與保存
血清/血漿：收集后盡快離心（3000 rpm，10分鐘），分裝后-20℃或-80℃凍存，避免反復(fù)凍融。
細(xì)胞上清：離心去除雜質(zhì)（如細(xì)胞碎片），直接用于檢測(cè)或暫存于2-8℃（24小時(shí)內(nèi)使用）。
樣本稀釋
用試劑盒提供的稀釋液（或PBS）將樣本稀釋至合適倍數(shù)，避免基質(zhì)效應(yīng)干擾（如血清稀釋10倍可減少非特異性結(jié)合）。
