公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細(xì)胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（

FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

3、細(xì)胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)

晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細(xì)胞移至含 6ml 培養(yǎng)基的 15ml 離心管中， 1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀用 6ml 培養(yǎng)基重懸，接種 25cm2培養(yǎng)瓶，于 37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

收到細(xì)胞后如何操作:

1、首先，觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請及時與我司技術(shù)支持聯(lián)系。

2、用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)，隔天再取出進行觀察。

3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。

4、可將培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管中，備用；細(xì)胞傳代時，可以將該培養(yǎng)基按照一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合使用，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

5、確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好后，應(yīng)及時將細(xì)胞凍存，再進行后續(xù)的實驗，避免后期實驗失誤可能發(fā)生細(xì)胞污染或死亡而導(dǎo)致的細(xì)胞丟失。

6、建議客戶收到細(xì)胞后前3天，100X、200X、400X各拍3-5張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我們技術(shù)支持溝通交流。

細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細(xì)胞計數(shù)。

     b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

三、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

phospho-LATS2 (Ser83)： 0酸化抑制基因LATS2抗體 家貓皮膚細(xì)胞;FCA-S1

NAMALWA人Butt's淋巴瘤細(xì)胞 NAMALWA human Butt's lymphoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大鼠周期素依賴性激酶抑制因子2A(CDKN2A)ELISA試劑盒 Horse IgG/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記馬IgG 0.1ml

phospho-LSP1 (Ser252)： 0酸化白細(xì)胞F肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體 PLAUR Others Mouse 小鼠 uPAR / PLAUR / CD87 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人膀胱基質(zhì)成纖維細(xì)胞HBdSF 大鼠周期素依賴性激酶抑制因子1A(CDKN1A)ELISA試劑盒 Horse IgM/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記馬IgM 0.1ml

LSP1： 白細(xì)胞F肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體 小鼠骨髓細(xì)胞;FDC-P1

MOLT-4細(xì)胞，人急性T淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞 大鼠卵巢癌細(xì)胞株,NUTU-19細(xì)胞 人外根殼細(xì)胞cDNAHHORSC cDNA 人雷帕霉素靶蛋白(mTOR)ELISA 試劑盒 CAD(Caspase-Activated Deoxyribonuclease) Caspase 激活的脫氧核糖核酸酶(抗原) 0.5mg

GNMT： 甘酸-N-甲基轉(zhuǎn)移酶 0.2ml

Rhesus antibody Rh BDKRB1 緩激肽B1受體抗體 CD244 Others Human 人 2B4 / SLAMF / CD244 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株;7WD10 人酪酸羥化酶(TH)ELISA 試劑盒 MYOG 肌紅蛋白抗原 0.5mg

GRP75： G蛋白偶聯(lián)受體75抗體 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC-C

5-8F人高轉(zhuǎn)移鼻咽癌細(xì)胞系LoVo人結(jié)腸癌細(xì)胞 LoVo human colon cancer cells DMEM/F12(1:1)+10% FBS 大鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(MCSF)ELISA試劑盒 LFA-3/CD58  大鼠淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3 96T

PRPS1L1： 蛋白酶體復(fù)合物C5抗體 BMPR1A Others Mouse 小鼠 ALK-3 / BMPR1A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HT-29 大鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA 試劑盒 SRP(Human signal recognization particle antibody)  人抗信號識別顆粒抗體 貓腎細(xì)胞;CRFK

人非色素睫狀上皮細(xì)胞 (HNPCEpiC)( 5×105 ) LX-2, 人肝星形細(xì)胞株 Human 大鼠巨嗜細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA試劑盒 BA(Human Blocking antibody)  人封閉抗體 人脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞RNAHCPEpiC miRNA5 μg

TNFSF12 Protein Rat 重組大鼠 TNFSF12 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) 大鼠巨嗜細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2)ELISA試劑盒 UU-Ab(Mouse Ureaplasma urealyticum antibody)  小鼠解脲脲原體抗體 CFR Others Human 人 CFR / CFR-alpha 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)